1.猪瘟病毒的生物学特性
♦ 猪瘟病毒(CSFV)是黄病毒科瘟病毒属.
与同属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒（BDV）之间，基因组序列有高度同源性，抗原关系密切，既有血清学交叉反应，又有交叉保护作用。
♦ 猪肾细胞是最常用的培养CSFV的细胞。病毒复制部位限于细胞浆，且不产生细胞病变。
♦ 猪瘟病毒只有一个血清型，但有毒力强弱之分。
CSFV理化特性
作用10min可使细胞培养液失去传染性
♦ 脱纤血中的CSFV在68℃30min尚不能灭活
♦ 含CSFV的猪肉和猪肉制品几个月后仍有传染性
♦ 在猪粪便中CSFV于20℃可存活2周，4℃可存活6周以上
♦ 具有脂蛋白囊膜，对乙醚等敏感,对胰蛋白酶中度敏感
♦ 2%氢氧化钠是最合适的消毒药
2.猪瘟活疫苗的生产技术规范
永顺公司猪瘟疫苗系列
• 猪瘟脾淋苗
普通苗
政府采购专用苗
• 猪瘟细胞苗
普通苗
零免苗
精制苗
政府采购专用苗
• 猪瘟ST细胞苗
普通ST苗
政府采购专用ST苗
毒种标准
♦ 对家兔的感染性 ：仅产生热反应，不致死家兔。
♦ 对细胞的感染性：不致细胞病变。
♦ 病毒含量：脾 毒 种≥100000RID/g，
细 胞 毒 种≥100000RID/ml ，
ST细胞毒种≥500000RID/ml。
♦ 安全性 ：用猪安检，体温、精神、食欲应正常。
♦ 免疫原性：脾毒对猪的最小免疫量为≤10-5/ml。
♦ 纯净：按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无细菌、霉菌、支原体及外源病毒污染(BVDV)。
♦ 特异性：按现行《中国兽药典》进行检验，应符合规定。
♦ 代数：基础种子为478～490代，脾毒种不超过5代，细胞毒不超过3代。
♦ 保存期：冻干毒种在-70℃为10年，-30℃为5年，
脾毒在-15℃以下不超过25日，
细胞毒在-15℃以下不超过3个月。
牛睾丸细胞质量标准
• 来源：牛睾丸采自非CSFV 、BVDV流行地区的健康小牛
• 细胞形态：细胞生长良好，符合牛睾丸细胞形态特征。
• 纯净：应无细菌、霉菌及支原体污染。
• 外源性病毒：用显微镜观察无特异性病变（CPE），
红细胞吸附试验为阴性，
用Vero检验，不出现任何病变。
用三价荧光抗体检验为阴性。
用RT-PCR/PCR、ELISA方法检验均为阴性
• 细胞代数：细胞传代控制在3代内。
传代细胞质量标准
来源：由来源清楚、符合兽用生物制品生产用的细胞系。
管理要求 :
1.细胞库的建立(原始 、基础 、工作细胞库 )
2.细胞库的管理
细胞代数：生产用细胞传代控制在20代内。
细胞系的检验
♦ 细胞形态：细胞生长良好，符合ST细胞形态特征。
♦ 纯净：应无细菌、霉菌及支原体污染。
♦ 外源性病毒：用显微镜观察无特异性病变（CPE），
♦ 红细胞吸附试验为阴性，
♦ 用Vero检验，不出现任何病变，
♦ 用三价荧光抗体检验为阴性。
♦ 用RT-PCR/PCR、ELISA方法检验均为阴性
♦ 细胞鉴别：
♦ 胞核学检查：
♦ 三致检验：
♦ 病毒培养适应性检验：
血清质量标准
• 性状：浅黄色、澄明粘性液体，无溶血或微溶血，无异物。
• 无菌检验：应无细菌、霉菌污染。
• 支原体检验：应无支原体污染。
• 猪瘟病毒繁殖试验：对猪瘟病毒繁殖无影响（产毒）
检验：BVDV-Ag/Ab均为阴性。
• 细胞生长功能：细胞生长良好、对细胞无毒性
• 热稳定性试验：无异常变化
• PH值：
• 总蛋白含量：35-50g/L（牛血清），60-110g/L（马血清）；
血红蛋白含量
• 细菌内毒素
• 保存条件
细胞毒液质量标准
• 纯净：应无细菌、霉菌、支原体污染。
• 病毒含量：牛睾丸细胞毒液病毒含量
ST 细胞毒液病毒含量
• 安全性：用脾毒接种细胞制备的毒液接种无猪瘟中和抗体的健康易感猪2头，每头肌肉注射5ml，测温观察21日，应无异常反应。
• 保存：在-15℃以下保存，应不超过3个月。
• 收毒次数：不超过5收次。
成品质量标准
• 性状：乳白色（细胞苗）或淡红色（脾淋苗）海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
• 无菌检验 ：按《兽药典》进行检验，应无菌生长。脾淋苗如有菌生长，每头份疫苗含非病原菌应不超过75个。
• 支原体检验： 按《兽药典》进行检验，应无支原体生长。
• 外源病毒检验： 按《兽药典》检验，应无外源病毒污染.
• 鉴别检验 ：按《兽药典》检验，应符合规定。
• 安全检验： 按《兽药典》检验，应符合规定，对猪安全。
• 效力检验：细胞苗病毒含量为≥750RID/头份；
采购专用细胞苗病毒含量为≥7500RID /头份；
脾淋苗病毒含量为≥150RID /头份。
ST细胞苗病毒含量为≥7500RID /头份.
• 剩余水分测定： 按《兽药典》检验，应符合规定。
• 真空度测定：按《兽药典》检验，应符合规定。
• 贮藏： -15℃以下保存，有效期为18个月（细胞苗）
12个月（脾淋苗）
3. 猪瘟疫苗生产、检验与研发过程中的生物安全管理
A．防止猪瘟疫苗产品污染外源微生物
——硬件要求
以防止猪瘟ST细胞苗污染BVDV为例，说明防止外源微生物污染的关键措施：
1. 毒种：用三价荧抗 与RT-PCR方法检测，应无BVDV污染。
2. 细胞：用三价荧抗 、 RT-PCR 与ELISA方法检测，应无BVDV污染。
3. 血清：用RT-PCR 与ELISA方法检测，应无BVDV污染。用钴-60辐照灭活处理。
4. 配苗用细胞毒液：用RT-PCR 方法检测，应无BVDV污染。
5. 冻干保护剂（牛奶）：用高压消毒方法灭活处理。
B. 防止检验与研发过程中猪瘟强毒散
1.强毒实验动物应饲养在负压净化系统环境中。
2.实验动物饲养人员与动物实验操作人员进入强毒实验区必须穿戴专用防护服、防护眼罩、防护手套。离开前充分消毒后脱去所有衣服后，并进行严格淋浴。
3.实验动物所产生的废水经专门的管道进入不锈钢罐经蒸汽消毒，检测合格后最后排放到公司总废水灭活池。
4.实验动物所产生的粪便经高温高压处理后交环卫部门。
动物尸体及废弃物经原位灭菌消毒后，再经高温高压处理。
