不同温度保存的疫苗稀释液对疫苗效价是否影响的试验

      影响疫苗效价的原因有很多，例如有疫苗因素、病原因素、动物因素以及人为因素等等，其在专业杂志中均有大量报道，而在疫苗稀释液因素方面报道则较少，或者说较少引起人们注意，但是，疫苗稀释液从生产厂家生产出来到终端用户使用，其与疫苗一样需经过保存、运输、使用过程，在此过程中，每一环节均有可能影响疫苗稀释液的质量，而其作为与疫苗一起注入动物机体的一部分，质量的好坏直接关系到疫苗的效价，从而影响机体的免疫应答。

      为此，采用3种不同温度、且均保存5天的猪用活疫苗稀释液，模仿其在冷链运输保存中一年四季外部环境出现温差变化可能对其质量影响及到终端用户所需时间，然后将其回溶细菌（包括革兰氏阴、阳性菌）、病毒活疫苗，同时采用中华人民共和国兽药典2015版等规定要求的各种疫苗所需的稀释液回溶相应疫苗作为对照组，均通过测定抗原效价进行同比，从而全面了解疫苗稀释液对疫苗效价的影响程度。

1.1.稀释液：

    1.1.1猪用活疫苗稀释液：2015094、2015220、2015221、2015222批。

     1.1.2 马丁肉汤：公司自制。

1.2.疫苗：

     1.2.1细菌性疫苗：多杀性巴氏杆菌病活疫苗（EO630）：2014005批，猪败血性链球菌活疫苗（ST171）：2015007批。

     1.2.2病毒性疫苗：猪瘟活疫苗（传代细胞源）：ST2015147批。

1.3.培养基:

     马丁琼脂平板、血琼脂平板均为公司自制。

1.4.实验动物：

     1.5～2.0KG家兔，购自广东省医学实验动物中心。

2.1．细菌性疫苗：

     将猪用活疫苗稀释液2015094批各取5瓶分别置放于2~8℃、25℃、37℃温度中，5天后取出，用其作为稀释液对多杀性巴氏杆菌病活疫苗（EO630）、猪败血性链球菌活疫苗（ST171）进行表面培养测定法活菌计数，同时采用马丁肉汤作为稀释液按同样方法进行活菌计数，然后通过比较观察不同温度保存的猪用活疫苗稀释液对细菌性活疫苗抗原的影响。

2.2.病毒性疫苗：

  将3批猪用活疫苗稀释液2015220、2015221、2015222批每批各取3瓶分别置放于2~8℃、25℃、37℃温度中，5天后取出，对ST2015147批猪瘟疫苗稀释成每毫升含1/20000头份，按每只1ml接种家兔，同时采用灭菌的生理盐水作为稀释液按同样方法测定兔体感染量（RID），然后通过比较观察不同温度保存的猪用活疫苗稀释液对猪瘟ST疫苗效价影响。

4.1从表1可看出：

   EO630活菌计数结果为5.0×10⁸CFU/头份~5.28×10⁸CFU/头份，均高于标准3.0×10⁸CFU/头份；ST171为1.01×10⁸CFU/头份~1.25×10⁸CFU/头份，均高于标准0.5×10⁸CFU/头份，表明采用3种不同温度保存的猪用活疫苗稀释液与兽药典规定用马丁肉汤作为稀释液对细菌活疫苗（含革兰氏阴、阳性菌）进行活菌计数，其结果均可达到标准以上；同时也表明采用3种不同温度保存的猪用活疫苗稀释液进行活菌计数差异不显著，说明猪用活疫苗稀释液在2℃至37℃范围内贮藏5天，其作为细菌活疫苗稀释液不影响细菌的抗原含量。

4.2从表2可看出：

     对于猪瘟ST疫苗，采用3种不同温度保存的猪用活疫苗稀释液与“猪瘟活疫苗（传代细胞源）制造及检验规程”规定用生理盐水作为稀释液接种兔体，RID测定结果是均可达到标准；同时也表明采用3种不同温度保存的猪用活疫苗稀释液（试验重复3次,即3个批次）进行猪瘟ST疫苗RID测得结果差异不显著，说明猪用活疫苗稀释液在2℃至37℃范围内保存5天，其作为猪瘟ST疫苗稀释液不影响猪瘟ST疫苗效价。

    本实验针对稀释液保存、运输过程中可能出现的环境温度波动状况而设计的。

     综上所述，猪用活疫苗稀释液在2℃至37℃范围内保存5天，其无论作为细菌活疫苗，还是作为病毒活疫苗的稀释液，均不影响疫苗的抗原效价，用户可以放心使用。